為您講解等度液相色譜儀的梯度洗脫

　　等度液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成，應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。等度液相色譜儀有等強度和梯度洗脫兩種方式。等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動相組成保持恒定，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品。梯度洗脫是在一個周期內(nèi)程序控制流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度和PH值等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異罰大的復(fù)雜樣品。采用梯度洗脫可以縮短分析時間，提高分離度，改善峰形，提高檢測靈敏度，但是常常引起基線漂移和降低重現(xiàn)性。梯度洗脫有低壓梯度（外梯度）和高壓梯度（內(nèi)梯度）兩種方式。

　　兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合，即有多種洗脫曲線：線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度常用，尤其適合于在反相柱上進(jìn)行梯度洗脫。在進(jìn)行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

　　1.要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相，有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍就不互溶，使用時更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

　　2.梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。

　　3.混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘主度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的大壓力。

　　4.每次梯度洗脫之后必須對色譜柱進(jìn)行再生處理，使其恢復(fù)到初始流動相流經(jīng)色譜柱，使固定相與初始流動相達(dá)到*平衡。