標準曲線法和標準加入法如何區(qū)分

  在分析化學中，特別是儀器分析實驗中，經(jīng)常用某物質(zhì)已校正的標準曲線來求相應(yīng)物質(zhì)的未知濃度。標準曲線通常是一條過原點的直線，被測組分含量可從標準曲線上求得。以分光光度計法為例，某特定波長的光經(jīng)過某物質(zhì)，可以被該物質(zhì)吸收、反射等，并且其濃度（ｃ）與吸光度（Ａ）之間在一定濃度范圍內(nèi)符合朗伯－比爾定律。

  但有時由于人為操作誤差、儀器系統(tǒng)不穩(wěn)定等因素，所有的實驗點往往不在同一條直線上，這就需要用數(shù)理統(tǒng)計方法找出各數(shù)據(jù)點誤差zui小的直線，對數(shù)據(jù)進行用zui小二乘法分析，求出回歸方程，然后繪制回歸曲線。標準曲線法和標準加入法是大家經(jīng)常會搞混的方法。簡而言之，標準曲線法適用于組成較為簡單的大批量式樣測定，操作比較簡單；標準加入法能有效消除集體不同造成的誤差，提高分析結(jié)果的準確性，但工作量大。

標準曲線法和標準加入法如何區(qū)分

1標準曲線法

也稱外標法或直接比較法，是一種簡便、快速的定量方法。

與分光光度分析中的標準曲線法相似，首先用欲測組分的標準樣品繪制標準曲線。

  具體方法是：用標準樣品配制成不同濃度的標準系列，在與待測組分相同的色譜條件下，等體積準確進樣，測量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標準曲線，此標準曲線應(yīng)是通過原點的直線。若標準曲線不通過原點，則說明存在系統(tǒng)誤差。標準曲線的斜率即為校正因子。

  在測定樣品中的組分含量時，要用與繪制標準曲線*相同的色譜條件作出色譜圖，測量色譜峰面積或峰高，然后根據(jù)峰面積和峰高在標準曲線上直接查出注入色譜柱中樣品組分的濃度。

  標準曲線法的優(yōu)點是：繪制好標準工作曲線后測定工作就變得相當簡單，可直接從標準工作曲線上讀出含量，因此特別適合于大量樣品的分析。

  標準曲線法的缺點是：每次樣品分析的色譜條件（檢測器的響應(yīng)性能，柱溫，流動相流速及組成，進樣量，柱效等）很難*相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差。此外，標準工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標準樣品（或已知準確含量的樣品），而實際樣品的組成卻千差萬別，因此必將給測量帶來一定的誤差

2標準加入法

  是一種被廣泛使用的檢驗儀器準確度的測試方法。這種方法尤其適用于檢驗樣品中是否存在干擾物質(zhì)。

  具體方法是：將一定量已知濃度的標準溶液加入待測樣品中，測定加入前后樣品的濃度。加入標準溶液后的濃度將比加入前的高，其增加的量應(yīng)等于加入的標準溶液中所含的待測物質(zhì)的量。如果樣品中存在干擾物質(zhì)，則濃度的增加值將小于或大于理論值。

  標準曲線法適用于標準曲線的基體和樣品的基體大致相同的情況，優(yōu)點是速度快，缺點是當樣品基體復(fù)雜時不正確。標準加入法可以有效克服上面所說的缺點，因為他是把樣品和標準混在一起同時測定的（“標準加入法”的叫法就是從這里來的），但他也有缺點就是速度很慢。標準曲線法可在樣品很多的時候使用，先做出曲線，然后從曲線上找點，那樣方便。而標準加入法，適合數(shù)量 少的時候用。

  在制備標準曲線時，標準液濃度選擇一般應(yīng)能包括待測樣品的可能變異zui低與zui高值，一般可選擇5種濃度。濃度差距是成倍增加或等級增加，并應(yīng)與被測液同樣條件下顯色測定。

  標準液的測定：在比色時，讀取光密度至少讀2-3次，求其平均值，以減少儀器不穩(wěn)定而產(chǎn)生的誤差。

案例分析：

配制兩個標液：一個是10ppb的鉛 一個是50ppb的鉛，來做標準曲線法和標準加入法的對比。

試驗一：我用50ppb的鉛 做了一條標準曲線 15 ，20，30，40，50做了一標準曲線，相關(guān)系數(shù)0.999，測量10ppb的鉛，得到的結(jié)果是11.2ppb；

試驗二：我用50ppb的鉛當成儲備液，把10ppb的鉛當成未知樣品，進行標準加入法測量，做了三個點，*個點加入10ppb，第二個點加入20ppb，第 三個點加入了30ppb，相關(guān)系數(shù)是0.9989，得到的blank（就是10ppb的樣品）結(jié)果是9.1ppb；

試驗三：我用50ppb的鉛當成儲備液，把10ppb的鉛當成未知樣品，進行標準加入法測量，做了五個點，*個點加入10ppb，第二個點加入20ppb，第三個點加入30ppb，第四個點加入40ppb，第五個點加入50ppb，相關(guān)系數(shù)是0.999，得到的blank（就是10ppb的樣品）結(jié)果是10.1ppb。

（備注：試驗一樣品取20微升，稀釋液10微升，基體改性劑5微升；試驗二和試驗三樣品取10微升，稀釋液取10微升，基體改性劑取5微升。）

疑問：

1.標準加入法和標準曲線法測同一個樣出現(xiàn)了三個不同的結(jié)果（9.1，10.1，11.2），是什么原因造成的？

2.標準加入法應(yīng)該至少做多少個點才比較合適？

是不是點越多越好？

3.標準加入法的相關(guān)系數(shù)是不是要一般要達到多少才可以出數(shù)據(jù)？不確定度如何評估？這幾個數(shù)據(jù)是不是都是正常的？

答疑：

試驗一：未將樣品濃度包含在標準曲線內(nèi)，所以偏差大；

試驗二：三個濃度點，較少，結(jié)果偏差較大；

試驗三：結(jié)果準確度高。

  標準加入法取的點數(shù)跟標準曲線法的一樣，都是要5個點（因為你是要出報告，需要很正規(guī)。在平常我們做實驗看看數(shù)據(jù)，就不會用到那么多的點）。吸光度的值在0.2~0.之間，在石墨爐中吸光度還是不要太高，要不然曲線很容易彎。置信度的要求跟標準曲線法一樣，火焰R=0.999以上，石墨爐R=0.995以上。

  順便說一下，標準加入法一定要用線性擬合。要用標準加入法要滿足三個條件，一是校正曲線必須是線性的。二，干擾是固定的，即干擾效應(yīng)的大小只取決于干擾組分的量。三，標準曲線取的點數(shù)多少，包括樣液本身，不過也有說是四點以上，有說是五點以上。

來源：實驗與分析