色譜分析時(shí)操作技巧

液相溶劑瓶小改進(jìn)：

     液相溶劑瓶原裝蓋上有兩個(gè)小孔，一直擔(dān)心空氣當(dāng)中的懸浮顆粒會(huì)落入瓶中，污染流動(dòng)相，為了避免污染，又防止出現(xiàn)內(nèi)外壓差，對(duì)溶劑瓶做了如下小改進(jìn)。

一、大一點(diǎn)的孔用一次性針筒過(guò)濾頭堵上，另一小孔則先將一次性針筒過(guò)濾頭套入一個(gè)塑料槍頭再插入。

二、裝水相的和有機(jī)相的溶劑瓶，分別選用無(wú)機(jī)相的和有機(jī)相的一次性針筒過(guò)濾頭。

三、我曾經(jīng)用空針筒套上過(guò)濾頭推拉空氣，測(cè)試無(wú)明顯阻力，用在溶劑瓶上應(yīng)該不會(huì)產(chǎn)生內(nèi)外壓差。

四、每三個(gè)月就更換一次，保證過(guò)濾空氣效果，改進(jìn)兩年多來(lái)對(duì)液相運(yùn)行無(wú)影響。

 毛細(xì)管電泳法操作經(jīng)驗(yàn)

  1 斷流的可能原因

 a、有氣泡。解決辦法：所有進(jìn)入毛細(xì)管的液體都要超聲排氣，特別是容易起氣泡的溶液，如SDS。

  b、有沉淀物。解決辦法：所有進(jìn)入毛細(xì)管的液體都要過(guò)濾，濾膜孔徑要比毛細(xì)管內(nèi)徑小。

 c、毛細(xì)管有裂口，zui容易裂的地方是窗口處和毛細(xì)管出口端，有時(shí)候看不出來(lái)，因?yàn)榧訅鹤⑺臅r(shí)候仍能看到液滴出來(lái)，需要用手碰一碰才能發(fā)現(xiàn)。

2 基線漂移

 a、毛細(xì)管沒(méi)活化好：需要用0.1 M氫氧化鈉多沖一沖

  b、毛細(xì)管沒(méi)平衡好：沖完氫氧化鈉和水后需要用buffer再?zèng)_一段時(shí)間，這個(gè)時(shí)間得根據(jù)buffer的組成而定。必要時(shí)候需要跑空白一段時(shí)間。

  c、燈接近壽命：查看燈的使用時(shí)間，如果已經(jīng)兩千多個(gè)小時(shí)接近三千小時(shí)的話，可以考慮換燈了。

 d、毛細(xì)管壽命已到。毛細(xì)管是有使用壽命的，要看怎么保養(yǎng)，當(dāng)然，還跟使用的buffer有關(guān)。有些buffer特別傷管子的。

3 常見(jiàn)緩沖溶液的使用

  緩沖溶液一般是先配好stock solution，使用的時(shí)候再進(jìn)行稀釋。但是stock solution也不能長(zhǎng)時(shí)間存放，0.1 M 的磷酸、硼砂等溶液常溫下一個(gè)星期就會(huì)有變化，再長(zhǎng)時(shí)間可以看到有沉淀析出。但是也不能因此放到冰箱去，因?yàn)榉诺奖湟矔?huì)有沉淀析出，常溫存放，然后每星期重配一次。另外，配置硼砂的時(shí)候要稍微加熱幫助溶解，不然溶解不了。但加熱也不要太猛烈，不然溶解效果也是不好。

4 sds使用注意事項(xiàng)

sds在配置過(guò)程中容易產(chǎn)生氣泡，所以如果用容量瓶來(lái)配置是不實(shí)際的。這時(shí)候就不能對(duì)sds的濃度做要求。所以，一般用量筒或者離心管配置就好了，加水的時(shí)候用玻棒引流，小心的攪拌，邊配置邊超聲促進(jìn)溶解。

5 毛細(xì)管的使用和維護(hù)

避免用強(qiáng)堿溶液長(zhǎng)時(shí)間沖洗，比如1 M氫氧化鈉，內(nèi)壁會(huì)被腐蝕的。長(zhǎng)時(shí)間不用的時(shí)候應(yīng)該吹干，兩端密封保存。也有人建議用水封存。

6 UV燈的使用注意事項(xiàng)

不要暴力關(guān)電，要在操作界面按關(guān)燈鍵。一般不超過(guò)兩小時(shí)暫停檢測(cè)不需要關(guān)燈，因?yàn)殚_(kāi)關(guān)燈都是會(huì)對(duì)燈造成損害的。

色譜柱的清洗和修補(bǔ)技巧

  1：用色譜甲醇做流動(dòng)相，以1.00ml/min的流速，反向（只適用于色譜柱兩端封口一致的色譜柱）沖洗一小時(shí)，不接檢測(cè)器。

2：用異丙醇，以0.3ml/min的流速，反向沖洗三小時(shí)

3：再用甲醇，以1.00ml/min的流速，反向沖洗30分鐘。

4：連接檢測(cè)器，正向連接色譜柱，用流動(dòng)性過(guò)渡，

5：基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣。進(jìn)樣色譜圖。

  采取措施：

1：挖去柱頭污染的填料，大約1.5mm，挖去的污染填料。

2：用同種填料，濕法填平挖去的柱頭填料，篩板用異丙醇超聲15分鐘，再用水超聲5分鐘，用濾紙擦干，上好柱頭螺絲。

3：流動(dòng)相沖洗30分鐘，不連接檢測(cè)器。

4：連接檢測(cè)器，過(guò)渡平衡，進(jìn)樣。

結(jié)論：根據(jù)色譜柱出現(xiàn)柱效降低，分離效果不好，嚴(yán)重拖尾，影響正常檢測(cè)的情況，進(jìn)行了反向沖洗，以及修補(bǔ)，效果還是可以的，再者：對(duì)于使用效果不好的色譜柱，要根據(jù)情況作相應(yīng)的處理，如果通過(guò)清洗能解決問(wèn)題的一般不要修補(bǔ)，清洗不能達(dá)到使用效果的再進(jìn)行修補(bǔ)。

進(jìn)樣針堵塞疏通技巧

    實(shí)驗(yàn)室的氣相色譜分析時(shí)，進(jìn)樣針堵塞是zui常見(jiàn)的問(wèn)題了，前幾天做實(shí)驗(yàn)，載氣流速都正常，柱子也剛老化過(guò)，出峰變低，懷疑是進(jìn)樣針有點(diǎn)兒堵了，燒了個(gè)熱水，用開(kāi)水把進(jìn)樣針的針頭給燙一下，然后再用針吸幾下熱水，完了之后再進(jìn)樣試試， 發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣還算正常了！用開(kāi)水煮的話可能效果會(huì)更好！